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DH5α大肠杆菌电转感受态细胞

DH5α大肠杆菌电转感受态细胞

简要描述:

DH5α大肠杆菌电转感受态细胞 是实验室最常用的一种质粒克隆用菌株,其φ80lacZ△M15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。

产品时间:2019-06-29

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DH5α Electrocompetent cell

大肠杆菌电转感受态细胞

产品标签

DH5α Electrocompetent Cell 电ji感受态细胞;TOP10DH10BXL1-Blue;1mm电转杯(电ji杯);Biorad 1652083;

 

产品订购: 

货号

产品名称

规格

价格(元)

MF2381-0250UL

DH5α Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

5×50μl

540

MF2381-1000UL

DH5α Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

20×50μl

1730

 

菌株描述

DH5α是实验室最常用的一种质粒克隆用菌株,其φ80lacZM15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。特别适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

DH5α菌株基因型: F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

产品描述

本品是大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制作所得的电ji感受态细胞,只能用于DNA的电ji转化,不能用于热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×1010 cfu/μg DNA且在-80能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号

组分名称

货号(规格)

MF2381-0250UL

MF2381-1000UL

MF2381-A

DH5α Electrocompetent cell

5×50μl

20×50μl

MF2381-B

Control Plasmid puC19, 10pg/μl

10μl

10μl

 

保存与运输条件:

保存:-80保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

 

注意事项

1) 感受态细胞保存在-80以下,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。

  • 整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
  • 加入DNA的体积不应大于感受态体积的1/10。DNA不纯或存在盐、乙醇、蛋白及缓冲液等污染时,会导致转化效率急剧下降。
  • 为确保高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5) 电ji感受态细胞加入电ji杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。

6) 电ji杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

7) 若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级

8) 对于连接产物转化:在转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液重悬产物,保证DNA浓度不超过100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。

9) 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头(普通200μl枪头应剪去枪头尖0.6cm)。避免用力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)将0.1 cm电ji杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。

2)取-80保存的电ji感受态细胞插入冰中5min,待其完全融化。加入目的DNA(质粒或连接产物),用手拍打管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。

【注意】:若需要测定转化效率,使用1μl 对照质粒 pUC19(10 pg/μl);对于连接产物,请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE buffer(货号:MS3537-500ML)重悬,DNA浓度不要超过100ng/μl,体积不超过5μl/50μl感受态。

3)用200μl枪头将感受态-DNA混合物快速移到电ji杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。

4)启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=1800 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将电ji杯快速放入电转槽中,电ji完成快速插入冰中。

5)2min后从冰中取出电ji杯,放室温,加入700μl不含抗生素的无菌SOC培养基(室温),用1ml枪吹吸电ji杯底部数次混匀后,转移到50ml离心管(比如:BD Falcon 50ml锥形离心管),向离心管中补加SOC培养基至5ml。37,225 rpm复苏60min。

6) 5000rpm,1min离心收菌,重悬后取100-200μl涂布到含相应抗生素的SOC平板上(因菌量较大,若全部

涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37培养箱过夜培养13-17h。

 

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货号

名称

规格

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5×50μl

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5×50μl

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5×50μl

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5×50μl

MF2388-0250UL

SURE Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

5×50μl

MS0018-10G

Ampicillin, Sodium Salt 氨苄青霉素钠

10g

MS0017-5G

Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐

5g

MS0019-10G

Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素

10g

MS0014-1G

Rifampicin, USP Grade 利福平

1g

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

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DH5α大肠杆菌电转感受态细胞

DH5α大肠杆菌电转感受态细胞

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