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较早公告: CCK-8细胞增殖及毒性检测的步骤详细说明1.向各孔中加入100μl细胞悬液。a)2.在37℃下预孵育培养板。b)3.向各孔中加入各浓度的待测溶液c)10μl。4.37℃下孵育。5.向各孔中加入10μl的CCK-8溶液d)。6.37℃下孵育1-4小时。e)7.测定450nm处的OD值。a)使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。b)建议使用CO2培养箱guo夜预培养。c)使用培养基或PBS来制备溶液。d)如果待测溶液有还原性,测定不含细胞,但含有CC
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Coelenterazine Native 天然腔肠素

Coelenterazine Native 天然腔肠素

型    号: MX4606-500UG
报    价: 598
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Coelenterazine Native 天然腔肠素(CTZ-Native)是自然界中存在最丰富的一种腔肠素,也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白(APO)的底物,也是海肾荧光素酶(Rluc)和分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc)等荧光素酶的作用底物。

MX4606-500UGCoelenterazine Native 天然腔肠素的详细资料:



Coelenterazine Native 天然腔肠素

产品关键词:

Coelenterazine (CTZ) 天然腔肠素;海肾荧光素酶(Rluc分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc;萤火虫荧光素酶(Fluc);In vivo bioluminescence imaging 活体动物体内成像技术;CAS NO50909-86-9

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Coelenterazine Native 天然腔肠素

MX4606-500UG

500μg

598

Coelenterazine Native 天然腔肠素

MX4606-1MG

2×500μg

1018

Coelenterazine Native 天然腔肠素

MX4606-5MG

5mg

2398

Coelenterazine Native 天然腔肠素

MX4606-10MG

10mg

3598

【温馨提示】:见我司懋康生物(maokangbio)提供的活体成像底物-腔肠素及衍生物产品专题。

产品描述

腔肠素(Coelenterazine)是在水生生物中发现的一种发光基团(luminophore),是许多荧光素酶的作用底物,包括海肾荧光素酶(Renilla reniformis luciferase, Rluc),分泌型膜锚定荧光素酶(Gaussia luciferase, Gluc)和薮枝虫荧光素酶(Obelia luciferase),和发光蛋白包括水母发光蛋白(Aequorin)的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶,在含分子氧的条件下,氧化腔肠素产生高能量的中间产物,在此过程发射蓝色光,光波长在450~480nm【见图1。而甲虫(或萤火虫)荧光素/荧光素酶(FLuc)系统不同,其在含分子氧的条件下,还需要ATPMg2+的存在才能同时发光,光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异,RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究,或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛,包括:1)活细胞或组织的钙离子检测;2)细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子(活性氧,ROS)化学发光检测;3)基因报告基因检测;4)动物活体检测;5ELISA和生物发光共振能量转移(BRET)用于蛋白相互作用研究;6)药物高通量筛选(HTS);

 

1. 海肾荧光素酶(Rluc)催腔肠素发光的反应流程

天然腔肠素(Coelenterazine NativeCTZ-Native)是自然界中存在最丰富的一种腔肠素,也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白(APO的底物,也是海肾荧光素酶(Rluc)和分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc)等荧光素酶的作用底物。前者用于检测钙离子浓度,后者用作荧光素酶的报告基因检测系统。还可用于生物共振能量转移BRET,细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平(ROS)的化学发光检测等

产品特性

1)   CAS NO55779-48-1

2)   化学名:8-benzyl-6-(4-hydroxyphenyl)-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl] -7H-imidazo [1,2-a]pyrazin-3-one

3)   同义名:Coelenterazine, nativ; native Coelenterazine; Coelenterazine free base; native-CTZ; 腔肠素游离酸;

4)   分子式:C26H21N3O

5)   分子量:423.46 g/mol

6)   纯度:>95%

7)   外观:黄色至棕黄色结晶性粉末

8)   溶解性:溶于甲醇或乙醇,不要溶于DMSO

9)   化学结构式:

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、  腔肠素工作液制备

【有关腔肠素溶解的注意事项】:

1)   腔肠素溶于甲醇或乙醇,不可溶于DMSO。腔肠素的水溶性相对比较低,一般情况需先将腔肠素溶于酸化的醇类溶剂配成相对高浓度的母液,然后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作浓度,现配现用。

2)   腔肠素在溶液中的稳定性比较低,最号于正式实验前才配制溶液(包括高浓度母液)。但若实际要求,必须保存母液,目前来说最稳定的溶剂是丙二醇,往内加入少量L-抗坏血酸,β-巯基乙醇,DTTDTE,或少量HCl能维持其还原态。不过,还原剂可能会减低氧化腔肠素(氧化为Coelenteramide)的动力学速率。也有可能破坏荧光素酶活性。而冻存在醇类溶剂中可能引起腔肠素沉淀,实际取决于溶液浓度。当然,可通过加热50-60℃,使得沉淀重新溶解。必须确保无可见沉淀,或在实验前(特别是活体动物实验)离心去沉淀。

1.1    腔肠素母液制备

1.2    腔肠素工作液制备

二、  操作方法

2.1 体外生物发光

2.2 体内动物成像

【注意】:腔肠素的注射剂量可能根据动物类型、品种、注射方式以及报告基因种类有所差异。最加的注射剂量请自行摸索或参考文献来做。

对于海肾荧光素酶报告基因系统,通过腹腔(IP)或静脉注射(IV)按照25-100μg/只小鼠能得到良好结果。对于分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc)报告基因系统,由于分泌型膜锚定荧光素酶代谢活性增加,相对来说需要更高量的腔肠素。文献(Tannous BA. Gaussia luciferase reporter assay for monitoring of biological processes in culture and in vivo.Nat Protoc.2009;4(4):582-591.)提到,当用静脉注射(IV)按照4mg/kg体重给药能得到良好结果。

a)根据自身实验室条件选择适当方法麻醉动物,视情况决定是否去皮(通常黑色皮毛动物需去皮)。

b)根据实际情况往动物体内注射相应剂量步骤1.2 配制好的腔肠素工作液。比如,对于海参荧光素酶报告基因系统,使用26-gauge针头注射器尾静脉注射100µl 2 mM (~1mg/ml)腔肠素工作液,然后立即对动物进行体内成像检测,以获得峰值信号。

相关产品

货号

名称

规格

MX4606-1MG

Coelenterazine Native 天然腔肠素

2×500μg

MX4607-1MG

Injectable native Coelenterazine 注射用天然腔肠素

2×500μg

MX4608-1MG

Coelenterazine h 腔肠素h

2×500μg

MX4609-1MG

Injectable h-Coelenterazine 注射用腔肠素h

2×500μg

MX4610-500UG

Coelenterazine 400 a 腔肠素400a

500μg

MX4611-500UG

e-Coelenterazine 腔肠素e

500μg

MX4612-500UG

Coelenterazine f 腔肠素f

500μg

MX4613-250UG

Coelenterazine cp 腔肠素cp

250μg

MX4614-250UG

Coelenterazine hcp 腔肠素hcp

250μg

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承以人为本,以诚为信、合同守信的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

 

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