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核酸凝胶染料

核酸凝胶染料

简要描述:

核酸凝胶染料适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。

产品时间:2016-09-28

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MKRed(效果同GelRed)核酸染料(10,000× 水溶液)

MKRed核酸凝胶染料特点

● 无毒性:MKRed 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远远小于EB。

● 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。

● 稳定性高: 适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定,耐光性强。

● 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。

● 操作简单:与 EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗 ,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。

● 与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,在 300nm 紫外光附近可得到zui激发。但是MKRed不能被488 nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发,因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。对于此类装置,我们推荐您使用DuGreen(Cat# 011或012),它和SYBR Green I的光谱相似,灵敏度相当,但更加稳定。


核酸凝胶染料使用方法简介

1.胶染法(用法同EB)(推荐方法)

(1) 制胶时加入MKRed 核酸染料(例如:每50mL 琼脂糖溶液中加入5μL MKRed 10,000× 储液,

以此比例类推)。

(2) 按照常规方法进行电泳。

注意事项:

♦ 此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做100块 50mL的胶。

♦ 由于MKRed具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将MKRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。MKRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。

♦ 如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关,请尝试:降低琼脂糖浓度;选用更长的凝胶;延长凝胶时间以保证边缘清晰;改进上样技巧或选择泡染法染色。

♦ 此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

2.泡染法

(1) 按照常规方法进行电泳。

(2) 用H2O将MKRed 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中,制成3× 染色液。(例如将15μL MKRed 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。

(3) 将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,zui合适染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5~10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min到1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。

注意事项:

♦ 用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。

♦ 3× MKRed染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。

几种核酸染料比较

名称

灵敏度

稳定性

对DNA 迁移的影响

安全性

适用性

MKRed

条带不弯曲,DNA片段不迁移

  • 是一种独特的油性大分子,不易挥发升华,不易吸入人体,不能穿透细胞膜进入活体细胞内,安全无毒。
  • 艾姆斯氏测试结果表明,MKRed在凝胶染色浓度下完全没有诱变性,因此完全没有致癌毒性。

通用大小片段电泳染色,与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置。标准的EB滤光片或SYBR滤光片都适用,使用普通紫外凝胶透射仪观察即可,在300nm紫外光附近可得到zui激发。

MKGreen

条带不弯曲,DNA片段不迁移

①  是一种独特的油性大分子,不易挥发升华,不易吸入人体,不能穿透细胞膜进入活体细胞内,安全无毒。
②  艾姆斯氏测试结果表明,DuGreen在凝胶染色浓度下完全没有诱变性,因此完全没有致癌毒性。

通用大小片段电泳染色,适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。

SYBR Green I

染料浓度较高时,条带容易弯曲,DNA片段迁移的现象明显

属花箐染料,能透过细胞膜进入活体细胞内,但容易生物降解,不会在体内残留,安全无毒。

100bp以上电泳染色,适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。

EB

条带不弯曲,DNA片段不迁移

①  分子量小,易挥发升华,易吸入人体,不易生物降解,在体内长期残留。
②  艾姆斯氏测试结果表明,EB容易引起有机体突变,是一种强诱变剂,具有高致癌性。

100bp以上电泳染色,背景荧光信号高;使用普通紫外凝胶透射仪观察。

Goldview

条带不弯曲,DNA片段不迁移

①  主要成分为吖啶橙,是一种煤焦油提取物,具有高毒,致癌,高诱变性。
②  易挥发升华,易吸入人体,能穿透细胞膜进入活体细胞内,不易生物降解,在体内长期残留。

100bp以上电泳染色,背景荧光信号高;适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。

 

特别提醒:

♦ 如果您使用的是紫外成像仪,请选择MKRed;如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测,请选择 MKGreen。

♦ 在极少数情况下,质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低,此时建议同时尝试两种染色方法以决定哪种方法更加合适。

订购信息:

品名

产地

货号

规格

单价

备注

MKRed(10,000× 水溶液)

MKbio

MF0754-500UL

500ul

460

现货

 

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