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BL21系列感受态细胞常见问题(懋康生物整理)
点击次数:509 发布时间:2018-04-24

BL21系列感受态细胞常见问题

 

以下是我司(懋康生物)整理的BL21系列感受态细胞常见问题,如有更多问题,欢迎在产品页给我们留言或发邮件到maokang

 

Part 1、BL21/BL21(DE3)/ BL21 (DE3) pLysS感受态细胞

一、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株和基因型

宿主菌Host Strain

基因型Genotype

BL21 strain

E. coli B F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm

BL21 (DE3) strain

E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

BL21 (DE3) pLysS strain      

E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) pLysS (CamR)   

基因型说明:

a)以上三个宿主菌都是大肠杆菌E. Coli. B/r菌株,不含lon蛋白酶,也缺乏外膜蛋白酶OmpT。这两个关键蛋白酶的缺乏降低菌株内表达外源蛋白的降解率。

b)DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(DE3 lysogen)(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),IPTG能诱导T7 RNA聚合酶的表达。

c)pLysS命名表明该菌株携带pLysS质粒,含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,从而能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。pLysS质粒赋予菌株氯霉素抗性(CamR),而且含有p15A复制起始子,这一起始子使该菌株兼容于含ColE1或pMB1复制起始子的质粒(比如pUC或pBR322来源的质粒)。

 

二、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株的应用特征

BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS三种宿主菌内T7启动子表达载体(比如pCAL, pET载体)呈现不同的蛋白表达水平。BL21(DE3)感受态细胞是全能型菌株,满足高水平蛋白表达且容易诱导。BL21 (DE3) pLysS感受态更严格控制毒性蛋白表达且具氯霉素抗性。

表达宿主

诱导方法

优点

缺点

BL21

λ噬菌体CE6感染

zui严格控制背景表达(非诱导表达)

诱导不如DE3衍生菌有效;诱导(感染)过程更冗长

BL21 (DE3)

IPTG诱导lacUV5启动子驱动的T7聚合酶

高水平表达

T7聚合酶泄露表达,引起潜在毒性蛋白的背景表达(非诱导表达)

BL21 (DE3) pLysS

IPTG诱导的T7聚合酶

容易诱导

与BL21 (DE3)相比,稍微抑制诱导表达

 

三、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株的异源蛋白表达特征

表达宿主

异源蛋白(Heterologous protein)表达特征

BL21 strain

非毒性蛋白的高水平表达,不能用于T7启动子驱动的蛋白表达(如pET) 

BL21 (DE3) strain

非毒性蛋白的高水平表达,用于T7启动子驱动的蛋白表达(如pET)

BL21 (DE3) pLysS strain     

非毒性和毒性蛋白的高水平表达,背景表达低于BL21 (DE3),BL21

 

更多问题持续添加中。。。。。。

 

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货号

产品名称

规格

价格(元)  

MF2331-1000UL     

BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化学感受态细胞  

10×100μl    

280

MF2331-5000UL

BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化学感受态细胞

50×100μl

1280

MF2332-1000UL

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 化学感受态细胞

10×100μl

280

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BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 化学感受态细胞

50×100μl

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

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